轉染試劑盒的標準操作步驟
更新時(shí)間：2016-01-27 點(diǎn)擊次數：2022次
轉染試劑盒可用于轉染的細胞包括各種細胞株和原代細胞，例如成纖維細胞，成肌細胞，間充質(zhì)干細胞，上皮細胞等等。轉染試劑盒都經(jīng)無(wú)菌處理，并通過(guò)嚴格質(zhì)量檢驗，可以直接使用。轉染試劑盒可在室溫(15～25℃)保存三個(gè)月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。
轉染試劑盒的標準操作步驟：
1. 使用前預熱試劑至常溫。
2. 轉染前一天，接種適量細胞懸液至100-mm培養皿、60-mm培養皿或6孔板中，放置到潮濕37°C 5% CO2 培養箱培養過(guò)夜。
3. 次日，吸去細胞培養液，加入新鮮培養液。
4. 取兩根無(wú)菌1.5ml eppendorf管，分別記為A、B。按下表，根據培養皿不同而加入不同體積的試劑：
5. 用移液管混勻B管中溶液并將B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中。用氣泡法混勻轉染混合物，這一步盡量在2分鐘內完成，室溫孵育30分鐘。
6. 將混合物逐滴加入到細胞中，輕輕搖晃培養皿使混合物均勻分布在細胞表面。
7. 放置到潮濕37°C、5%CO2培養箱中培養過(guò)夜。
8. 次日早上用新鮮培養基更換細胞培養液，于37℃ 5%CO2培養箱中繼續培養24-48h。
9. 檢驗轉染效率(如熒光觀(guān)察，蛋白質(zhì)印跡等)。
轉染試劑盒使用注意事項：
轉染前以細胞融合度不超過(guò)80%為宜，接種密度因所采用的細胞系和細胞的倍增時(shí)間而有所不同。
高純度的質(zhì)粒是獲得高轉染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋。
轉染時(shí)，B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中，請勿混亂順序。
溶液的pH值關(guān)系到轉染效率，盡量避免把轉染試劑盒的溶液長(cháng)時(shí)間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。
轉染時(shí)由于質(zhì)粒不同、細胞不同，*的質(zhì)粒用量需自行摸索。
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